Tipo de Cultivos

·         ¿Qué es un medio de cultivo?

En microbiología, un cultivo es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como lo son bacterias en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado.

Los medios de cultivo son considerados técnicas de laboratorio, pueden ser líquidos o sólidos, los cuales contienen nutrientes necesarios para simular las condiciones de vida libre en la que se encuentran los microorganismos y poderlos cultivar.

·         Clasificación de los medios de cultivo

Se pueden clasificar según la consistencia, según la composición, según las sustancias inhibitorias, según los nutrientes.

•   Simples. Poseen los requisitos nutricionales básicos para permitir el desarrollo bacteriano general.
•  Enriquecidos. Son medios simples a los que se le añaden ciertos elementos indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes.
•  Medios selectivos. Son aquellos caldos o agares que estimulan el crecimiento de una o unas especies de bacterias concretas e inhiben el de otras.
•  Medios diferenciales. Son aquellos en los que permitimos el crecimiento de distintas comunidades bacterianas, pero gracias a las propiedades del medio, podemos diferenciarlas entre ellas.
•  

·         Función de los medios de cultivo

Los medios de cultivo son sustancias que se utilizan para cultivar y mantener microorganismos en el laboratorio con el objetivo de hacer crecer microorganismo como bacterias, virus y hongos, es:

•  Aislar y separar especies microbianas
•  Conocer el metabolismo de los microorganismos 

Agar MacConkey

Principio y uso

es un medio de cultivo sólido. selectivo y diferencial, que permite el aislamiento exclusivo de bacilos gramnegativos. Por esta razón permite distinguir entre bacilos fermentadores y no fermentadores de la lactosa. Es uno de los medios de cultivo más utilizados en un laboratorio de microbiología.

Que nutrientes contiene formula g/L

·         Peptona 20,0

·         Lactosa 10,0

·         Cloruro de sodio 5,0

·         Sales biliares 1,5

·         Rojo neutro 0,03

·         Cristal violeta 0,001

·         Agar bacteriológico 13,5

·         pH final del medio listo para su uso: 7,1 ± 0,2.

Preparación

• Para un litro de agar MacConkey se debe pesar 50 gr del medio deshidratado, luego se coloca en una fiola y se disuelve en un litro de agua destilada. Después de 10 minutos de reposo se calienta mezclando constantemente hasta dejar hervir por 1 minuto.
• Luego se coloca la fiola en la autoclave y se esteriliza a 121 °C por 20 minutos. Culminado el tiempo, se saca de la autoclave y se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45 °C, para posteriormente servir en placas de Petri estériles dentro de una campana de flujo laminar o frente al mechero de Bunsen
• Dejar solidificar y guardar en un portaplaquero de forma invertida y refrigerar en nevera a 2-8 °C hasta su uso.
• Para obtener un agar MacConkey que inhiba el efecto swarning que produce el género Proteus se usa un agar MacConkey bajo en sal.

Microorganismos que pueden crecer en el

·         E. coli

·         S. typhimurium

·         S. sonneii

·         P. mirabilis

·         S. aureus

Agar Sangre

Principio y uso

El agar sangre, es un medio enriquecido, diferencial, usado para aislar microorganismos fastidiosos y detectar actividad hemolítica. La β-hemolisis, se manifiesta como una lisis y digestión completa de los eritrocitos que rodean la colonia, por ejemplo, algunas bacterias del género Streptococcus

• El agar sangre es un medio enriquecido de uso general que se utiliza a menudo para cultivar organismos quisquillosos.
• Distinga las bacterias en función de sus propiedades hemolíticas (hemólisis β, hemólisis α y hemólisis γ (o no hemolítica)).

Que nutrientes utilizan

·         Caseína 15,0

·         Peptona de soya 5,0

·         Cloruro de sodio 5,0

·         Agar bacteriológico 13,5

·         Suplemento (ml / l):

·         Sangre de cordero desfibrinada 50,0 pH final del medio listo para su uso: 7,3 ± 0,2.

Preparación

• Suspender 28 g de polvo de agar nutritivo en 1 litro de agua destilada.
• Caliente esta mezcla mientras revuelve para disolver completamente todos los componentes.
• Autoclave la mezcla disuelta durante 15 minutos a 121 grados Celsius.
• Después de esterilizar en autoclave el agar nutritivo, deje que se enfríe, pero no se solidifique.
• Cuando el agar se haya enfriado a 45-50°C, agregue 5% (vol/vol) de sangre desfibrinada estéril calentada a temperatura ambiente y mezcle suave pero completamente.
• Evite las burbujas de aire.
• Dispensar en placas estériles mientras está líquido.

Microorganismos que pueden crecer en el

Este agar nos permite distinguir 3 tipos de bacterias: los beta-hemolíticos, alfa-hemolíticos y gamma-hemolíticos.

• Los beta-hemolíticos son aquellos que tienen la capacidad de lisar o romper completamente los glóbulos rojos, formando un halo claro alrededor de las colonias, por tanto, producen hemólisis ß o ß-hemólisis, y los microorganismos son llamados ß-hemolíticos. Ejemplos de bacterias ß-hemolíticas son Streptococcus pyogenes y Streptococcus agalactiae.
• Los alfa-hemolíticos son los que realizan una hemólisis parcial, donde la hemoglobina es oxidada a metahemoglobina, generándose una coloración verdosa alrededor de las colonias. Este fenómeno se conoce como hemólisis α o α-hemólisis, y a las bacterias se les clasifica como α-hemolíticos. Ejemplo de bacterias α-hemolíticos son Streptococcus pneumoniae y Streptococcus del grupo viridans.
• Las bacterias gamma-hemolíticas o no hemolíticas crecen sobre el agar sin generar cambios en el mismo, efecto conocido como γ-hemólisis, y los microorganismos son γ-hemolíticos. Ejemplo de bacterias γ-hemolíticas: algunas cepas de Streptococcus del grupo D (Streptococcus bovis y Enterococcus faecalis).

 

Agar BHI

Principio y uso

Por sus siglas en inglés (Brain Heart Infusion) Es un medio de uso general adecuado para el cultivo de una amplia variedad de tipos de organismos, incluidas los bacterias como levaduras y hongos filamentosos, a partir de nuestras clínicas.

Es un medio selectivo ya que la infusión del cerebro y el corazón ha resultado ser efectiva para el cultivo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos muchos patógenos. Se ha utilizado como medio base para las nuevas fórmulas de medios de cultivo cuando se suplementa con sangre o agentes selectivos. Se recomienda actualmente como medio universal para bacteriología aerobia y para la recuperación primaria de hongos a partir de muestras clínicas y no clínicas.

Fórmula 

Microorganismos que pueden crecer en el:

Este medio puede utilizarse para el cultivo de levaduras, bacterias, hongos y organismos filamentosos.

Los componentes del BHI incluyen la mezcla de tejidos de diferentes animales con la peptona, glucosa y tampón fosfato.

Incubar las placas durante 24 - 48 horas para bacterias y candida, y hasta un máximo de 5 días para trichophyton. Las bacterias y candida deben incubarse a una temperatura de 35 a 37 °C y trichophyton de 25 a 30 °C

AGAR PDA

Principio y uso 

El agarre de papa y destroza son medios comunes de cultivo microbiológico que se preparan a partir de infusión de patata y dextrosa. El lagar de patata y dextrosa es el medio más utilizado para el crecimiento de hongos y levaduras que atacan a las plantas vivas o materia vegetal muerta en descomposición.

Algunos procedimientos señalan bajar el pH del medio a 3.5 ± 0.1 con ácido tartárico al 10% para inhibir el crecimiento bacteriano. La infusión de patata promueve un crecimiento abundante de los hongos y levaduras y el lagar es adicionado como agente solidificante. 

Fórmula 

Preparación 

La infusión de patata se puede preparar hirviendo 200 g de patatas cortadas en rodajas sin pelar en 1 litro de agua destilada durante 1800 segundos (ya que tiene varios nutrientes que necesita el agar para que los microorganismos puedan proliferar) y luego filtrar el caldo a través de una gasa. Se añade agua destilada de manera que el volumen total de la suspensión es 1 litro. Se añaden 20 g de dextrosa y agar en polvo (20 g), el medio se esteriliza en un autoclave a 121 °C durante 15 minutos.

Microorganismos que pueden crecer en el:

Los organismos comunes que pueden ser cultivados en PD son las levaduras como la Candida albicans y Saccharomyces cerevisiae y hongos tales como Aspergillus niger.

Medio de cultivo sólido para la enumeración de mohos y levaduras en alimentos, especialmente productos lácteos y otras muestras. El agar de patata glucosado es un medio recomendado para la detección y enumeración de hongos a partir de alimentos como productos lácteos, cárnicos y frutos secos.

Medio TSI

Pricipio y uso 

TSI Agar (Triple Sugar Iron Agar) (agar triple azúcar hierro) es un medio de diferenciación para organismos entéricos gram

 negativos basada en su capacidad para fermentar dextrosa, lactosa y sacarosa y para producir sulfuro.

TSI Agar se utiliza para diferenciación de bacilos entéricos gram negativos sobre la base de la fermentación de carbohidratos y la producción de ácido sulfhídrico.

Que nutrientes utilizan

• Fórmula aproximada por litro de agua purificada
• Digerido pancreático de caseína 10,0 g
• Digerido péptico de tejido animal  10,0 g
• Cloruro sódico  5,0 g
• Lactosa 10,0 g
• sacarosa 10,0 g
• Dextrosa  1,0 g
• Sulfato ferroso de amonio  0,2 g
• Tiosulfato sódico 0,2 g
• Rojo fenol  0,025 g
• Agar 13,0 g

Procedimiento de análisis

Emplear técnicas asépticas.

Para inocular, tocar con cuidado sólo el centro de una colonia aislada en un medio en placa entérico con una aguja estéril fría, insertarla en el medio en la base del tubo y luego extender la muestra en ambas direcciones por la superficie del agar inclinado. Se deben estudiar por separado varias colonias de cada placa primaria dado que es posible que se produzcan infecciones mixtas.

Incubar con las tapas flojas a 35 °C y examinar después de 18 – 24 h para detectar fermentación de carbohidrato, producción de gas y producción de ácido sulfhídrico. Es posible observar una combinación de cualquiera de estas reacciones. No incubar durante un período más prolongado que 24 h porque la reacción ácida en el agar inclinado de los organismos fermentadores de lactosa y sucrosa pueden convertirse a una reacción alcalina.

MEDIO DE CULTIVO AGAR SIM

Principio y uso 

Agar SIM es un medio usado para la diferenciación de bacilos entéricos con base a la producción de ácido sulfhídrico, indol y la movilidad.

Medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno por los microorganismos. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento

Medio de cultivo en el cual la tripteína y la peptona aportan nutrientes para el desarrollo microbiano. El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas y particularmente de la tripteína y puede ser metabolizado por algunas bacterias para formar indol.

En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Ehrlich (Indol Reactivo REF B1550361) o de Kovac´s, para originar un compuesto de color rojo.

A partir del tiosulfato de sodio los microorganismos pueden generar ácido sulfhídrico que reacciona con el hierro presente formándose un compuesto de color negro.

El agar es el agente solidificante y a esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde más allá de la línea de siembra del microorganismo en estudio.

Fórmula (en gramos por litro)

• Tripteína 20.0
• Peptona 6.1
• Sulfato de hierro y amonio 0.2
• Tiosulfato de sodio 0.2
• Agar 3.5

Microorganismos que pueden crecer en el:

• Escherichia coli 
• Escherichia coli 
• Escherichia coli 
• Salmonella typhimurium 
• Shigella flexneri 
• Klebsiella pneumoniae   
• Proteus mirabilis 

Citrato de simmons:

Principio y Usos:

Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.

Que nutrientes contiene formula g/L:

• Citrato De Sodio: 2.0
• Cloruro De Sodio: 5.0
• Fosfato Dipotásico: 1.0
• Fosfato Monoamónico: 1.0
• Sulfato De Magnesio: 0.2
• Azul De Bromotimol: 0.08
• Agar: 15.0
• PH Final: 6.9 ± 0.2

Preparación:

Suspender 24,2 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición durante 1 o 2 minutos para disolución total. Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Enfriar y solidificar en posición inclinada (pico de flauta).

Microorganismos que pueden crecer en el:

• Escherichia coli
• Enterobacter aerogenes
• Salmonella enterica
• serotipo Typhimurium
• Shigella flexneri

Caldo Urea:

Principio y Usos:

Medio de cultivo utilizado para identificar Enterobacterias con base a la hidrólisis de urea a partir de muestras clínicas y otros materiales.

Que nutrientes contiene formula g/L:

• Extracto de levadura: 0.10 g 
• Rojo de Fenol: 0.01 g
• Fosfato Monopotásico: 9.10 g 
• Urea: 20.0 g
• Fosfato Dipotásico: 9.50 g
• pH 6.8 ± 0.2 a 25 °C

Preparación:

Suspender 38.7 gramos del medio en un litro de agua destilada sin calentar, cuando el polvo este disuelto esterilizar por filtración. Vaciar en tubos estériles. 

Procedimiento: 

1. A partir de un cultivo puro de 18-24 horas sembrar los tubos de caldo urea. 

 2. Incubar condiciones aeróbicas a 35±0.2°C durante 24h. 

Algunos microorganismos pueden requerir mayor tiempo de incubación

Microorganismos que pueden crecer en el:

• Escherichia Coli
• Proteusmirabilis
• Proteus vulgaris
• Salmonella enterica serotipo
• Typhimurium 

Agar Sal y Manitol

Principio y uso 

BD Mannitol Salt Agar se utiliza para el aislamiento selectivo de estafilococos y para la detección de Staphylococcus aureus a partir de muestras clínicas.

Método microbiológico. El agar sal manitol en una fórmula diseñada por Chapman para la diferenciación de estafilococos positivos a la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus) de los estafilococos negativos a la coagulasa. Este agar se utiliza para el aislamiento de estafilococos a partir de muestras clínicas, de cosméticos y de pruebas de límite microbiano. El agar sal manitol contiene peptonas y extractos de carne bovina, que suministran los nutrientes esenciales. Una concentración de cloruro sódico de 7,5% tiene como resultado una inhibición parcial o completa de los organismos bacterianos diferentes de los estafilococos.

Fórmula en g/L  

• Extracto de carne bovina 1,0 g
• Digerido pancreático de caseína 5,0
• Digerido péptico de tejido animal 5,0
• Cloruro sódico 75,0
•  D-manitol 10,0 Rojo fenol 0,025

Preparación 

1. Suspender 111 gramos del medio en un litro de agua purificada. 
2. Mezclar bien y calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. 
3. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50°C y vaciar en placas dobles de Petri estériles 

Microorganismos que pueden crecer en el:

• Staphylococcus aureus
  
• Staphylococcus epidermidis
• S. aureus y S. epidermidis
• Micrococos Grandes
•  Enterococcus,
• Streptococcus
• Bacterias gram negativas

Agar para Métodos Estándar

Principios y usos

El Agar para Métodos Estándar (PCA) está recomendado por APHA para el recuento de bacterias de interés sanitario, que son indicadores de contaminación o carga microbiana en alimentos. El digerido enzimático de caseína proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. El extracto de levadura es fuente de vitaminas, particularmente del grupo B. La dextrosa es el carbohidrato fermentable que proporciona carbono y energía. El agar bacteriológico es el agente solidificante.

Fórmula en g/L

• Digerido enzimático de caseína 5 
• Agar bacteriológico 15 
• Glucosa anhidra 1 
• Extracto de levadura 2,5 

Preparación 

1. Suspender 23,5 gramos del medio en un litro de agua destilada. 
2. Mezclar bien y disolver con calor y agitación frecuente. 
3. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 44-47 ºC y distribuir en recipientes apropiados

Microorganismos que pueden crecer en el:

• Staphylococcus epidermidis 
• Staphylococcus aureus 
• Staphylococcus aureus 
•  Bacillus subtilis
•  Escherichia coli

Agar Sabouraud 

Principio y uso 

El agar Sabouraud es un medio de cultivo que por sus características funciona como medio de enriquecimiento para hongos y que en caso de contener cloranfenicol u otro antibiótico, se convierte en un medio selectivo para los mismos. El medio contiene peptonas y una elevada concentración de glucosa que favorece el crecimiento de los hongos sobre las bacterias. Es utilizado para el cultivo de hongos, especialmente dermatofitos, aunque también pueden desarrollarse en él cierto tipo de bacterias filamentosas tales como Nocardia.

Vista inferior una placa Petri de agar de Sabouraud con una colonia de Trichophyton rubrum var. rodhaini.

Composición típica de nutrientes 

• 40 g/L glucosa.

• 10 g/L pluripeptona.

• 15 g/L agar-agar.

• 0,05 g/L [cloranfenicol]

• pH 5.6 como máximo.

Preparación 

Rehidratar 65 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC ( 15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri estériles. Cuando se requiera el medio en tubo de ensayo, distribuir el volumen requerido antes de esterilizar y posteriormente enfriar en posición inclinada. Conservar en refrigeración de 2 a 8ºC.

Agar nutritivo

Principio y uso 

El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativamente altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas.

El medio contiene extracto de carne, peptona y agar, siendo una formulación suficiente para el desarrollo de los microorganismos. El extracto de carne proporciona al medio fuente de carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas.

En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como una sustancia espesa, con colonias difícilmente observables.

Composición típica de nutrientes 

• 0,5% de peptona;

• 0,3% de extracto de carne/extracto de levadura;

• 1,5% de agar;

• 0,5% de cloruro de sodio;

• agua destilada;

• pH casi neutro (6,8) a 25 °C

Preparación

Rehidratar 23 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar en refrigeración de 2 a 8ºC.

Microorganismos que pueden crecer en el

El agar nutritivo es un medio de cultivo sólido no selectivo y no diferencial. En este medio crecen todo tipo de bacterias no exigentes desde el punto de vista nutricional, como por ejemplo:

• Pseudomonas aeruginosa

• Serratia marcescens

• Staphylococcus aureus

• Bacillus sp.

• Escherichia Colin

  
  

  
  
  

  
  

  
  

  Hemocultivo

  El hemocultivo es un método diagnóstico que se realiza para la detección de microorganismos en la sangre y así, posteriormente, realizar la identificación y susceptibilidad antimicrobiana.

  Preparación

  El hemocultivo no tiene preparación previa.

  Cómo se realiza un hemocultivo

  El hemocultivo se realiza mediante la extracción de sangre en tres puntos distintos de forma consecutiva, esto es, se realizarán tres extracciones de sangre diferentes. Se realizan cuando el paciente presenta un pico febril de más de 37,8. Esto es necesario ya que en los casos que no hay pico febril puede ocurrir que no se encuentre la bacteria o el hongo en la sangre.

  Complicaciones de un hemocultivo

  La complicación del hemocultivo puede ser:

  • Hemorragia en el punto de punción venoso produciendo un hematoma o infección en la zona de punción. Es importante recoger el cultivo con las medidas de asepsia pertinentes, desinfectando bien la zona y procurando no manipular el material ya que puede dar lugar a una contaminación y ser interpretado como una bacteria que en realidad no está presente.

  Resultados

  Los resultados del hemocultivo serán negativos, en aquellos casos en que no hay presencia de bacteria, ni de hongos. Esto quiere decir que no hay presencia de infección en la sangre del paciente.

  Los resultados positivos serán anormales e indican la presencia de una bacteria o un hongo. Se suele asociar un antibiograma que indica qué tratamiento antibiótico o anti fúngico será el más eficaz para tratar la infección del paciente.

  ¿Qué enfermedades se detectan con un hemocultivo?

  La enfermedad que detecta es la bacteriemia, esto se produce cuando hay una infección, que estaba en una zona del organismo y se disemina a través de la sangre por todo el organismo.

  Las enfermedades digestivas se pueden producir por las entero bacterias septicemias.

  Las enfermedades del sistema urinario pueden producir también septicemia, el germen más común es el escherichia coli.

  Los catéteres venosos también pueden producir septicemia por estafilococos.

  ¿Cuánto tiempo se tarda en hacer un hemocultivo?

  El tiempo que se tarda en hacer un hemocultivo es igual que el de una extracción de sangre.

  Para obtener resultados de un hemocultivo hay que esperar de entre 24 y 72 horas si se trata de bacterias. En los casos de hongos, se puede prolongar más el tiempo ya que tardan más en crecer. En la mayoría de los casos, en 48 horas se conocerá qué bacteria está produciendo la infección y cuál es el mejor tratamiento a realizar. Esto hará que,tras un tratamiento empírico con antibiótico de inicio, se pase a cambiar el antibiótico, si este no era eficaz para la bacteria que estaba produciendo la infección.

  
  

  Medio de Cultivo EMB agar (con Eosina y Azul de Metileno) 

  USO 

  Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. 

  FUNDAMENTO 

  El medio de cultivo combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos.

  Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas. El agar es el agente solidificante. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. 

  También, pueden crecer especies de Candida y se observan como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas se observan como colonias de color azul lavanda; esto puede ocurriraunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtieneademás, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

  FÓRMULA (en gramos por litro)

  PEPTONA........................................................................................................................................10.0 LACTOSA...........................................................................................................................................5.0 SACAROSA ….....................................................................................................................................5.0 FOSFATO DIPOTÁSICO .....................................................................................................................2.0 

  EOSINA .............................................................................................................................................0.4 AZUL DE METILENO ......................................................................................................................0.065 

  AGAR ..............................................................................................................................................13.5 PH FINAL: 7.2 ± 0.2

  PREPARACIÓN 

  Rehidratar 36 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar a temperatura ambiente

   

  CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO

  Medio de cultivo deshidratado: color púrpura, homogéneo, libre deslizamiento. Medio de cultivo preparado: color púrpura vinoso.

  Nota: La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color púrpura se restaura por agitación. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo.

  ALMACENAMIENTO 

  Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC. 

  Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.

  PROCEDIMIENTO 

  Siembra: En superficie, por estriado directo a partir de la muestra. En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

  Incubación: En aerobiosis, a 33-37 °C durante 18-24 horas.

  INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS 

  Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico.

  Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del medio, incoloras.

  MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS 

  Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requerimiento.

  PRECAUCIONES 

  -Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclusivo. 

  - No utilizar el producto si al recibirlo su envase o dañado. 

  - No utilizar el producto si existen signos de contaminación o deterioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento. 

  - Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto. 

  - Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad establecidas por el laboratorio. 

  - Las características del producto pueden alterarse si no se conserva apropiadamente.

  - Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del mismo según reglamentaciones vigentes.

  MICROORGANISMOS QUE PUEDEN CRECER EN EL 

  Escherichia coli-Colonias azula moradas

  Enterococcus faecalis-Inhibición parcial

  Salmonella typhimurium-Colonias incoloras

  Shigella flexneri-Colonias incoloras

  Staphylococcus aureus-Crecimiento parcialmente inhibido

  Candida albicans-Colonias plumosas (rosa pálido)                

        Agar bilis y Rojo violeta  

En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano, las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de la flora Gram positiva, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y el rojo neutro es el indicador de pH. El agar es el agente solidificante.

Los coliformes son bacterias que fermentan la lactosa, acidifican el medio y producen un viraje del indicador de pH al color rojo inten-so. Debido a esto, se observan como colonias de color rojo púrpura, de 1 a 2 mm de diámetro, rodeadas, generalmente, de una zona rojiza de bilis precipitada.

Composición

3.0 g/l EXTRACTO DE LEVADURA

7.0 g/l PEPTONA

1.5 g/l SALES BILIARES

10 g/l LACTOSA

5.0 g/l CLORURO DE SODIO.

0.03 g/l ROJO NEUTRO.

0.002 g/l CRISTAL VIOLETA

15 g/l AGAR.

pH FINAL: 7.4 ‡ 0.2

Suspender 41,5 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición durante 1 minuto para disolución total. No esterilizar en autoclave.

Agar Chocolate 

Es una variante del agar sangre. Contiene glóbulos rojos que han sido lisados por el suave calentamiento a 56 °C. Este agar se usa para el delicado y exigente crecimiento de bacterias respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae.

15 g Proteasa Peptona no3

2.5 g Hidrolizado de hígado

5.0 g Extracto de Levadura

5.0 Cloruro sódico

7 % Sangre de Caballo calentada

5.0 g Cloruro sódico

12.0 g Agar

0.5 g Factores de crecimiento

PH 7,4+/- 0,2

Preparación de Agar Chocolate:

agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estéril (Britasheep) al medio esterilizado, fundido y enfriado a 45-50 ºC. Calentar a 80 ºC durante 10 minutos mez- clando frecuentemente. Dejar enfriar a 45-50 ºC y distribuir en pla- cas de Petri estériles.